【轉(zhuǎn)染小課堂】帶你了解轉(zhuǎn)染的奧妙和神奇！

轉(zhuǎn)染(Transfection):是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

原理：將DNA導入細胞使得它可利用細胞自身的細胞機制表達和合成蛋白質(zhì)，將RNA導入細胞則是用來通過終止翻譯來降低某特定蛋白的合成。

轉(zhuǎn)染的RNA在細胞質(zhì)中發(fā)揮作用，DNA則需被轉(zhuǎn)運到細胞核中從而達到有效的轉(zhuǎn)染。在核內(nèi)，DNA會被短暫表達或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細胞。

轉(zhuǎn)染類型：

瞬時轉(zhuǎn)染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此，一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析，在轉(zhuǎn)染后24-96h內(nèi)分析結(jié)果。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可以作為一種游離體整合到宿主細胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。

轉(zhuǎn)染方式：

正向轉(zhuǎn)染：細胞培養(yǎng)板中先加入細胞然后再加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物的方法。例如：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導法、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)活化的樹枝狀分子介導法、病毒介導法等。

反向轉(zhuǎn)染：核酸和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物先加入到孔板中，然后再向小孔中加入細胞。例如：顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學方法:使用載體分子中和或使帶負電荷的核酸帶正電荷，包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質(zhì)體脂質(zhì)分子介導法、陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、通過其他陽離子聚合物(如聚乙烯，PEI，活化的樹枝狀分子介導法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉(zhuǎn)移到細胞中的方法(也稱為轉(zhuǎn)導)，包括病毒介導法。

物理方法:將核酸直接遞送到細胞質(zhì)或細胞核中，包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉(zhuǎn)染影響因素：

核酸類型：質(zhì)粒DNA，mRNA，siRNA，miRNA的mimic和inhibitors...

細胞密度：一般來說，當細胞密度達到60%~80%時進行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會影響轉(zhuǎn)染效果。

細胞類型：如原代細胞、貼壁細胞、懸浮細胞、神經(jīng)細胞、腫瘤細胞、昆蟲細胞等。

細胞系的健康程度和存活力

轉(zhuǎn)染試劑類型:脂質(zhì)體、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)和活化的樹枝狀分子。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供多種形式和規(guī)格的轉(zhuǎn)染試劑，供您選擇：

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二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

三、RNAi轉(zhuǎn)染試劑