細胞消化的注意事項有什么？

　　細胞培養(yǎng)中的消化傳代操作是指將細胞從當前的培養(yǎng)瓶、皿中分離出來，經(jīng)過消化處理后，分散到新的培養(yǎng)瓶、皿中進行繼續(xù)培養(yǎng)。那么你知道細胞消化的注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

　　一、胰蛋白酶的選擇

　　EDTA是一種螯合劑，可以與金屬離子結合。含有EDTA的胰蛋白酶除了具有胰蛋白酶的消化作用外，還具有螯合金屬離子的作用。在細胞培養(yǎng)中，含有EDTA的胰蛋白酶，通過螯合細胞表面的鈣離子，破壞細胞與細胞之間的黏附作用，從而使細胞分離出來。

　　因此，如果需要進行細胞解離和分離操作，可以選擇含有EDTA的胰蛋白酶；如果只需要進行消化傳代操作，可以選擇不含EDTA的胰蛋白酶。

　　二、消化時間的掌握

　　消化時間的長短會影響細胞的生長和狀態(tài)。如果消化時間過長，可能會導致細胞死亡或者受損；如果消化時間過短，則可能會導致細胞未能完q分散，影響細胞的生長和分化。但細胞多長時間能被消化下來，并不完q取決于胰蛋白酶，還和消化的溫度、細胞的密度、以及消化環(huán)境有關。

　　通常，37°C下進行消化可以縮短消化時間。我們的胰蛋白酶平時一般放在冰箱內，在消化操作之前，可以提前拿出。加入胰蛋白酶后，可以把培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱內進行消化，這樣可以有效縮短消化時間。另外，不應該在細胞密度太高時才想起來進行消化傳代。當密度太高時，細胞之間的黏連會加劇，此時同等的消化條件，會需要花費更多的時間進行消化，進一步提高了判斷消化進度的難度。比較合理的傳代密度應該在70-80%之間。

　　三、其他注意事項

　　在加入胰蛋白酶之前，通常會使用pbs進行潤洗，潤洗后，應該徹d扔棄瓶內的pbs后，再加入胰蛋白酶進行消化。

　　加入胰蛋白酶的量應該是剛剛沒過整個培養(yǎng)瓶底部即可。

　　在消化過程中，如果發(fā)現(xiàn)細胞解離太快，可以把培養(yǎng)瓶豎起來，讓瓶壁上殘留的消化液進行消化。

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