脂質體轉染的原理與方法

　　脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分廣泛，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。下面讓我們一起來看看脂質體轉染的原理與方法吧！

　　脂質體轉染操作步驟

　　進行實驗之前，請先規劃好實驗，一般細胞轉染需要24h-72h，所以要充分了解細胞生長速度，計算所需脂質體和DNA的儲備量，并確認準備好所需試劑：Opti-MEM無血清培養基，Lipofectamine轉染試劑，以及DNA。

　　1、細胞鋪板

　　（1）一般會選擇復蘇細胞傳代3-4次，從解凍過程中恢復過來可以穩定生長的細胞進行細胞轉染，傳代次數高(>30-40)時，細胞的生長速度和形態會改變。

　?。?）如果提總蛋白，一般選擇六孔板進行轉染，因為轉染的細胞提取蛋白的總量能達到200ug，一般夠做并且需要的DNA和Lipofectamine又相對比較少。

　?。?）傳代條件取決于所用的細胞系。對于快速生長的細胞，倍增時間為16小時(如HEK293)。對于生長緩慢的細胞，倍增時間為36小時(如原代細胞)。

　?。?）轉染當天，將細胞鋪板。如果在轉染前一天或更早時間鋪板，轉染效率可能下降，如果是簡單細胞系的轉染，可以直接在前一天晚上鋪板，第二天來轉染。轉染時，細胞密度會影響轉染效率，細胞密度保持在匯合率為70-90%（這個前提是轉染24h，如果轉染48h則需要匯合率為50-70%），細胞的鋪板和轉染也可同時進行。

　　2、細胞轉染

　　吸去培養皿中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。更換無血清培養基。準備轉染制備液，用滅菌后的EP管制備。以六孔板為例，A液：用200μl Opti-MEM稀釋4μg質粒；B液:用200μl Opti-MEM稀釋10μl lipo2000，分別將A液、B液輕輕混勻，靜置5min，吸取B液加入至A液中，輕輕混勻，室溫靜置20min。加入轉染試劑到每個孔的培養基中，6h后，更換成完q培養基，繼續培養到24-48小時（不同的質粒和脂質體最佳搭配比例不同，轉染前，應該摸一個最佳配比。質粒：脂質體=1：1，1：1.5，1：2，1：2.5，1：3，1：3.5的梯度比例來檢測最佳轉染比例，一般質粒有帶熒光，可以通過觀察每組熒光強弱來判斷轉染效率）。以下為不同規格的培養板需要加DNA和lipo2000的量。

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