細(xì)胞培養(yǎng)常用抗生素

抗生素在細(xì)胞培養(yǎng)中的使用可以最大限度地降低污染，從而降低細(xì)胞、試劑的費(fèi)用損失和時(shí)間損失。因此，細(xì)胞培養(yǎng)常用抗生素有哪些呢？一、嘌呤霉素鹽酸鹽Puromycin,Dihydrochloride嘌呤霉素(Puromycin)是一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，能有效抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)，還能抑制原生生物、藻類(lèi)、哺乳動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞的生長(zhǎng)，一般2天內(nèi)能殺死99%的細(xì)胞。二、鹽酸萬(wàn)古霉素VancomycinHydrochloride鹽酸萬(wàn)古霉素(Vancomycinhydrochloride)是一...

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分子實(shí)驗(yàn)中DNA連接酶的作用機(jī)制

DNA連接酶(DNAligases)是一類(lèi)重要的酶，在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。一、ATP依賴(lài)性連接在真核生物的連接酶如DNA連接酶I中，連接反應(yīng)是ATP依賴(lài)性的。ATP的水解驅(qū)動(dòng)了DNA鏈的連接。連接反應(yīng)主要發(fā)生在DNA雙鏈斷裂的末端。T4DNA連接酶是典型的ATP依賴(lài)性連接：（1）原理與特點(diǎn)：T4DNA連接酶是一種來(lái)自噬菌體T4的連接酶，其主要原理是在DNA鏈斷裂的末端引入磷酸二酯鍵，將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)。它需要ATP作為輔助能量。（2）優(yōu)點(diǎn)：T4DN...

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分子實(shí)驗(yàn)中DNA連接酶的作用原理

DNA連接酶(DNAligases)是一類(lèi)重要的酶，在DNA復(fù)制、修復(fù)和重組過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它們的主要功能是連接DNA鏈上的磷酸二酯鍵，形成完整的DNA雙鏈。這一過(guò)程對(duì)于維持基因組的完整性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。DNA連接酶的基本作用原理是通過(guò)催化DNA鏈的連接，以形成連續(xù)的磷酸二酯骨架。連接過(guò)程通常包括以下三個(gè)步驟：（1）底物識(shí)別DNA連接酶識(shí)別DNA分子中需要連接的兩個(gè)斷裂部位(通常是5'末端和3'末端)。（2）磷酸基團(tuán)的激活在連接前，DNA連接酶通常需要結(jié)合ATP(腺苷三...

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抗體抗原測(cè)定的Elisa方法

在醫(yī)學(xué)臨床、生物學(xué)研究上，用于測(cè)定各種各樣的抗原、半抗原和抗體，Elisa法為雜交瘤細(xì)胞株的篩選提供了簡(jiǎn)便、靈敏、快速的測(cè)定方法。那讓我們一起來(lái)看看抗體抗原測(cè)定的Elisa方法吧！抗體抗原測(cè)定的Elisa方法一：直接法1、將抗原吸附在固相載體表面；2、添加一種封閉試劑，防止檢測(cè)抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合；3、添加直接偶聯(lián)某種酶（如HRP）的檢測(cè)抗體。該檢測(cè)抗體將結(jié)合抗原，并且剩余的抗體會(huì)從孔中洗掉；4、添加這種酶的底物；5、短暫孵育后，在酶標(biāo)儀上測(cè)定每個(gè)孔的信號(hào)。抗體抗原測(cè)定的El...

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Elisa檢測(cè)之組織樣本的處理方法

Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對(duì)于Elisa實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。組織樣本一般制成組織勻漿，處理方法如下：(1)使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織，盡快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暫時(shí)不處理的組織，置于圓底微量離心管中，浸入液氮中“速凍”，在-80℃下存儲(chǔ)樣品備用）。(2)用預(yù)冷的PBS緩沖液（0.01M，pH=7.4）洗滌組織去除殘留的血液，稱(chēng)重后備用。若組織塊較大，需先剪碎。(3)在冰上用研磨緩沖液（常用PBS緩沖液，但最好使用50mMT...

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