你知道細胞轉染實驗中轉染效率低的原因嗎？

轉染細胞效率低下的原因在生物醫學研究中，將外源基因導入細胞以研究其功能或使細胞展現出新的特性是非常常見的實驗手段。然而，轉染細胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉染細胞效率低下的原因，以期為提高轉染效率提供有益的思路。1.細胞類型和狀態不同的細胞類型具有不同的轉染效率。一些難轉染的細胞，如神經元和肝細胞，通常需要更復雜的轉染技術。此外，細胞的生長狀態也會影響轉染效率，處于對數生長期的細胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如...

查看更多

RNA的種類與功能介紹

RNA的分類1.信使RNA(mRNA)信使RNA是RNA的一種，主要功能是將DNA上的遺傳信息傳遞到蛋白質合成機器——核糖體上，從而實現蛋白質的。信使RNA的結構簡單，一般由一條單鏈RNA組成。mRNA的長度差異較大，哺乳動物的mRNA長度一般在5×102～1×105個核苷酸，這種長度的差異使得mRNA能夠攜帶更多的遺傳信息。在細胞中，mRNA的含量占到了總RNA的1%～5%，雖然mRNA的含量相對較少，但種類繁多，因為人體中約有2萬多個基因，每個基因都會產生一種mRNA。正...

查看更多

脂質體轉染的原理與方法

脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分廣泛，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。下面讓我們一起來看看脂質體轉染的原理與方法吧！脂質體轉染操作步驟進行實驗之前，請先規劃好實驗，一般細胞轉染需要24h-72h，所以要充分了解細胞生長速度，計算所需脂質體和DNA...

查看更多

實驗中的抗體應用問題和解決方案

抗體是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個特征，該外來目標被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標記還是間接標記?如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用...

查看更多

一步法RT-qPCR實驗優化小技巧

常見的RT-qPCR流程一般分為RNA提取，逆轉錄、熒光定量PCR三個步驟，當有的課題需要對某物種進行多種處理后，檢測某個基因的表達水平，以驗證該基因應對不同脅迫壓力的耐受力；或者經某種病原菌侵染后，檢測寄主不同基因的表達水平，以探究可能涉及的通路及互作機理等……對于這幾類樣本數量較大，但樣本只需要檢測一次的實驗方案，我們常常推薦一步法RT-qPCR，即逆轉錄與熒光定量PCR配制一管體系，只需一次上機即可完成表達量的檢測。由于將RNA逆轉錄與熒光定量PCR的體系配制合為一步，...

查看更多